Trennung und Kultivierung von Mikro organismen

Ihn zu trennen und zu kultivieren

Mikro organismen existieren in einem gemischten Zustand in der Natur. Um die gewünschten Stämme zu erhalten, müssen sie von ihnen getrennt werden. Wenn es versehen tlich kontaminiert wird, wenn es konserviert wird, muss es gereinigt werden. Es gibt viele Methoden zur Trennung und Reinigung von Mikro organismen, aber das Grundprinzip ist ähnlich. Das heißt, die zu trennende Probe wird bis zu einem gewissen Grad verdünnt, und die Zellen (oder Sporen) des Mikro organismus werden so weit wie möglich in einem dispergierten Zustand gehalten. und dann werden sie zu einer reinen Einzel kolonie gezüchtet. Die obige Arbeit ist jedoch untrennbar mit dem Prozess der Inokulation verbunden, bei dem ein Mikro organismus auf ein anderes sterilisiertes Medium übertragen wird.

Material und Werkzeug zur Klassifizierung der mikro biologischen Impfung:

Inkubator mit konstanter Temperatur, Impf ring, Glasstab, Pipette, Alkohol lampe, Kulturmedium, E. coli, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Hefe usw.

Operations methode der Impfung:

1. Schräge Impfung (Verbinden Staphylococcus aureus)

Wischen Sie Ihre Hände vor dem Betrieb mit 75% Alkohol ab und zünden Sie die Alkohol lampe an, nachdem sich der Alkohol verflüchtigt hat. Halten Sie das Dehnung srohr und die geneigte Oberfläche zwischen dem linken Daumen und den anderen vier Fingern, so dass die geneigte Oberfläche und die Seite mit der Dehnung nach oben und in einer horizontalen Position zeigen. Drehen Sie zuerst die Belastung und den Tampon des Abhangs, um das Herausziehen beim Inokulieren zu erleichtern. Halten Sie den Impf ring in der linken Hand (wie das Halten eines Stiftes), sterilisieren Sie zuerst das Ringende an der Flamme und sterilisieren Sie es dann, indem Sie es in den Rest des Reagenzglases strecken. Verwenden Sie den Ringfinger, den kleinen Finger und die Handfläche Ihrer rechten Hand, um gleichzeitig das Keim rohr und den Baumwoll stopfen oder die Reagenzglas kappe des geneigten Reagenzglases heraus zuziehen. und dann langsam den Reagenzglas mund sterilisieren (nicht zu heiß verbrennen). Den verbrannten Impf ring in das Samenröhrchen ziehen, den Impf ring an der Innenwand des Reagenzglases oder das Medium ohne Moos berühren, ausreichend abkühlen lassen, dann vorsichtig ein wenig Moos kratzen und dann ziehen Sie es aus dem Rohr Impf ring. Erweitern Sie den beimpften Ring schnell mit Bakterien in ein anderes zu verbindendes Reagenzglas. Machen Sie eine "Z"-Form von der Unterseite des Abhangs auf und ab dicht. Manchmal ist es auch möglich, eine Impf nadel zu verwenden, um eine Linie in der Mitte des Mediums zur schrägen Inokulation zu ziehen, um die Wachstums eigenschaften der Bakterien zu beobachten. Nachdem die Impfung abgeschlossen ist, wird die Inokulations schleife zurück gezogen und der Baumwoll stopfen eingeführt. Sterilisieren Sie den Impf ring. Legen Sie die Impf schlaufe ab und ziehen Sie den Baumwoll stopfen fest.

2. Flüssige Impfung

Verbinden Sie das geneigte Medium mit dem flüssigen Medium. Diese Methode wird verwendet, um die Wachstums eigenschaften der Bakterien und die Messung der biochemischen Reaktion zu beobachten. Die Operations methode ist die gleiche wie zuvor, aber der Reagenzglas mund ist nach oben geneigt, um zu verhindern, dass die Kultur flüssigkeit heraus fließt und die Bakterien verbindet, impfen Reiben Sie den Ring und die Innenwand der Röhre ein paar Mal, um die Bakterien auf dem Ring zu waschen. Nach der Impfung wird ein Baumwoll stopfen eingeführt, und das Reagenzglas wird vorsichtig in die Handfläche geklopft, um die Bakterien vollständig zu zerstreuen. Das flüssige Medium aus dem flüssigen Medium inokulieren. Wenn der Stamm flüssig ist, verwenden Sie zusätzlich zum Impf ring eine sterile Pipette oder einen Tropfer. Wenn Sie impfen, ziehen Sie einfach den Baumwoll stopfen neben der Flamme heraus, führen Sie die Mündung des Rohrs durch die Flamme, verwenden Sie eine sterile Pipette, um die Bakterien lösung in die Kultur lösung zu saugen, und schütteln Sie es gleichmäßig.

3. Platten impfung

Score und die Bakterien auf dem Teller verteilen. Kreuz inokulation Siehe separate Kreuz linien methode. Ausbreitung und Impfung Injizieren Sie die Bakterien lösung mit einer sterilen Pipette in die Platte und beschichten Sie die Oberfläche der Platte gleichmäßig mit einem sterilisierten Glasstab.

4. Impfung

Die Bakterien in das feste tiefe Kulturmedium impfen. Diese Methode wird verwendet, um anaerobe Bakterien zu impfen oder die physio logische Leistung bei der Identifizierung von Bakterien zu beobachten. Die Operations methode ist die gleiche wie oben, aber die verwendete Impf nadel sollte gerade sein. Punktieren Sie die Impf nadel von der Mitte des Kulturmediums aus, bis sie sich nahe am Boden des Röhrchens befindet, dringen Sie jedoch nicht ein und ziehen Sie dann langsam den ursprünglichen Punktion weg heraus.

Abtrennung Operations methode:

1. Verdünnung trenn methode

Dispergieren Sie die abgetrennte Probe durch kontinuierliche Verdünnung auf ein Minimum, ziehen Sie dann eine bestimmte Menge in die Platte und mischen Sie sie mit dem zum Schmelzen geeigneten Agar medium. so dass die dispergierten Bakterien an Ort und Stelle fixiert sind, um eine einzige Kolonie zu bilden. Escherichia coli oder Hefe wird mit sterilem Wasser als bakterielle Suspension zubereitet. Nehmen Sie mehrere sterile Reagenz gläser mit jeweils 9ml sterilem Wasser. Pipetten Sie 1ml der vorbereiteten Bakterien suspension und geben Sie sie in das erste Reagenzglas mit 9ml sterilem Wasser, so dass es 10 mal verdünnt wird, was 10-2 ist. Ziehen Sie 1ml aus dem ersten Reagenzglas (10-2) und injizieren Sie es in das zweite Reagenzglas mit sterilem Wasser, so dass es 100-mal verdünnt wird, was 10-2 ist. Betreiben Sie auf die gleiche Weise, bis es auf 10-5-10-6 verdünnt wird. Ziehen Sie genau 0,2 ml der bakteriellen Lösung jeder Verdünnung bei 10-5-10-6 und geben Sie sie in die nummerierte leere sterile Schale. Wiederholen Sie die gleiche Verdünnung, um drei Gerichte zu machen. Gießen Sie das geschmolzene und auf 45 abgekühlte Agar medium in jede der oben genannten Platten. Drehen Sie es vorsichtig, um das Medium und die Bakterien suspension nach dem Erstarren gründlich zu mischen. Legen Sie es in einen 37-oder 38-Grad-Inkubator und inku bieren Sie es für 24-48 Stunden. Beobachten Sie das Wachstum und die Verteilung der Kolonien auf der Platte.

2. Flach bett Schreiber trennungs methode

Die Platten streifen trenn methode ist eine Methode zum Trennen von Mikro organismen durch Teilen des Inokulation rings auf der Oberfläche des Platten mediums durch Zonen einteilung. Das Prinzip besteht darin, die mikrobielle Probe "von Punkt zu Linie" mehrmals auf der Oberfläche des festen Mediums zu verdünnen, um den Zweck der Trennung zu erreichen. Gießen Sie die Platte auflösen das Rindfleisch-Extrakt-Pepton-Agar mittel, gießen Sie die Platte und lassen Sie es horizontal stehen, bis es fest ist. Verbrennen Sie den Impf ring an der Flamme der Alkohol lampe und warten Sie auf Abkühlung. Nehmen Sie eine gemischte Impf flüssigkeit aus Staphylococcus aureus und Escherichia coli. Halten Sie die Agar platte in der linken Hand und heben Sie den Deckel leicht an, während Sie sich der Flamme nähern. Halten Sie den Impf ring rechts und strecken Sie sich in die Schüssel. Machen Sie eine Schreiber linie in einem Bereich auf der Platte. Der Impf ring ist 30-40 ° von der Oberfläche der Platte entfernt. Berühren Sie vorsichtig den Winkel und schieben Sie mit Ihrer Handgelenks kraft leicht auf der Oberfläche. Kratzen oder betten Sie die Oberfläche der Tablette nicht in die Basis ein. Verbrennen Sie den Impf becher, um die verbleibende bakterielle Flüssigkeit auf dem Impf ring abzutöten. Nach dem Abkühlen den Impf ring in die Schale verlängern. Nachdem Sie ein wenig Kontakt mit der im ersten Bereich gekreuzten Linie hergestellt haben, drehen Sie um 90 °. Die beiden Bereiche werden weiterhin durchquert. Nach dem Markieren den Impf becher nach dem Abkühlen impfen, verwenden Sie die gleiche Methode, um Linien in anderen Bereichen zu zeichnen. Nachdem alle Linien markiert sind, verwenden Sie einen speziellen Buntstift am Boden der Schale, um den Stamm, das Datum, die Gruppe und den Namen anzugeben. Stellen Sie die gesamte Petrischale auf den Kopf und legen Sie sie in einen Inkubator mit konstanter Temperatur. 37 Nach 24-48 Stunden Kultivierung herausnehmen und beobachten. Achten Sie auf die Eigenschaften des Kolonie schalters, Größe, Farbe, Kante, Oberflächen struktur, Transparenz usw.

, Vorsicht maßnahmen:

1. Der Impf raum sollte sauber gehalten werden, die Arbeits platten und Wände mit pulverisierter Phenol seifen flüssigkeit schrubben und regelmäßig mit Milchsäure oder Formaldehyd begasen. Vor jedem Gebrauch sollte es durch UV-Lampe sterilisiert werden. Überprüfen Sie regelmäßig die Sterilität des Impf raums. Vor dem Betreten des Impf raums sollte zunächst die Körperpflege erfolgen, im Puffer raum sollten Arbeits schuhe, Hüte, Arbeits kleidung und Masken ausgetauscht werden. Arbeits kleidung, Arbeits schuhe und Masken dürfen nur im Impfraum benutzt werden. Es ist nicht erlaubt, an andere Orte zu gehen, und es sollte regelmäßig ersetzt und desinfiziert werden. Die geimpften Reagenz gläser, Dreiecke und Flaschen sollten mit dem Namen und Datum des Kulturmediums und der Sorte gekennzeichnet sein. Alle Gegenstände, die in den Impf raum gebracht werden, müssen im Puffer raum mit 70% Alkohol abgewischt werden. Vor der Impfung beide Hände mit 70% Alkohol oder Xinjieer sterilisieren, die Flamme der Alkohol lampe während der Operation nicht verlassen; der Tampon wird nicht zufällig platziert; die Impf werkzeuge müssen vor und nach dem Gebrauch flammen sterilisiert werden.

2. Der Inkubator sollte häufig gereinigt und desinfiziert werden.